Mesure du virus grippal aéroporté dans un service d’urgence hospitalier

À l’aide d’une réaction en chaîne de la polymérase en temps réel, nous avons confirmé la présence de virus grippaux aéroportés et constaté que% des particules détectables du virus de la grippe se trouvaient dans la fraction respirable des aérosols. les résultats fournissent des preuves que le virus de la grippe peut se propager par la voie aérienne

ltre avec -μm pores -; SKC À L / min, la première étape a recueilli des particules avec un diamètre & gt; μm, la deuxième étape recueilli des particules avec un diamètre de – um, et le filtre recueilli des particules avec un diamètre & lt; L’échantillonneur est conforme aux critères d’échantillonnage des particules respirables de la Conférence américaine des hygiénistes industriels gouvernementaux / Organisation internationale de normalisation. Pour éliminer la contamination par transfert, les échantillonneurs ont été lavés à l’isopropanol et séchés à l’air après chaque journée d’échantillonnage. Virginia University Hospital Morgantown en février La collecte des échantillons a été effectuée l’après-midi; Un total d’échantillonneurs d’aérosols stationnaires et d’échantillonneurs d’aérosols personnels ont été utilisés. Deux échantillonneurs stationnaires ont été placés cm et cm au-dessus du sol sur chaque trépied dans le trépied de la salle d’attente le premier jour et des trépieds dans les jours suivants. salle d’attente et dans des salles d’examen choisies au hasard Un échantillonneur stationnaire a été placé ~ cm au-dessus du sol dans la salle de réception et de triage. Les échantillonneurs stationnaires ont été utilisés par des médecins pour chaque patient et ont subi un test QuickVue Influenza Quidel exclut les particules du virus de la grippe recueillies par le médecinLa température intérieure moyenne ± SD était de C ± ° C, avec une humidité relative moyenne ± SD de% ±% et une pression atmosphérique moyenne ± SD de, ± Pa les tarifs étaient – les changements d’air / h dans les salles d’attente et dans la salle de réception et de triage et – les changements d’air / h dans les salles d’examen. n Ambion a été ajouté directement aux tubes de l’échantillonneur d’aérosol Les filtres de back-up ont été transférés dans des tubes coniques en polypropylène -mL Becton Dickinson contenant la solution Lysis / Binding Les échantillons ont été dopés avec XenoRNA-Ambion en tant qu’ARN de contrôle interne. le kit d’isolation d’ARN viral MagMAX Ambion Isolement d’ARN viral à partir d’une dose de vaccin FluMist Le vaccin MedImmune a été réalisé comme décrit ailleurs L’ADNc complémentaire a été généré par transcription inverse de l’ARN isolé en utilisant le kit de transcription inverse. Biosystems Les échantillons ont été amplifiés dans un Mastercycler Eppendorf dans les conditions suivantes: ° C pour min, ° C pour min, et ° C pour s Un contrôle négatif sans matrice a été effectué pour chaque jour où des échantillons ont été obtenus. Détection PCR en temps réel d’un échantillon conservé région du gène M de la matrice du virus de la grippe A et le contrôle interne de XenoRNA a été réalisé en utilisant le mélange de sonde d’apprêt AIV-M et Detecti. Ambion Primers pour la région homologue dans le gène de la matrice B de la grippe ont été synthétisés par Applied Biosystems Custom Oligo Synthesis ServiceLa PCR en temps réel pour la grippe a été réalisée en utilisant la chimie TaqMan Applied Biosystems sur un réel. -Time PCR System Biosystems Appliqués aux conditions suivantes: ° C pour min, ° C pour min, cycles à ° C pour s, et ° C pour min XenoRNA- réactions ont été effectuées de manière similaire, sauf un total de cycles a été utilisé Avec l’hypothèse cette dose infectante de culture tissulaire médiane TCID & gt; unité est équivalente à la copie de l’ARN viral, le nombre relatif de TCID & gt; les particules virales ont été calculées par analyse de régression pour comparaison avec des dilutions en série de l’ADNc FluMist isolé de & gt; – TCID & gt; virus de la grippe atténué vivant Un contrôle négatif sans matrice a été inclus dans tous les tests de PCR en temps réel, et toutes les réactions ont été effectuées en double échantillons PCR positifs pour le gène de la matrice A de la grippe ont été purifiés en utilisant le kit QIAquick PCR Purification Les échantillons de Qiagen ont été soumis à l’installation de séquençage et de synthèse du bureau des services de recherche de l’Université de Géorgie à Athens, en Géorgie. Toutes les réactions de séquençage ont été effectuées avec l’amorce spécifique de Matrix: ‘-TGC-AAAAACATCTTCAAGTCT-CTG-‘ Applied Biosystems Basic L’outil de recherche d’alignement local BLAST a été utilisé pour confirmer l’identité du virus viral amplifié M RNARésultats Le virus grippal Aérosolisé A a été détecté sur des jours différents dans le tableau des échantillonneurs les jours et les contrôles internes étaient négatifs; Par conséquent, les données n’ont pas été utilisées. Les jours où les contrôles internes étaient positifs, des échantillons positifs pour la grippe ont été trouvés dans les échantillonneurs stationnaires situés dans les salles d’attente et de triage et dans les échantillonneurs personnels portés par les médecins des urgences. salles d’examen En raison des quantités limitées d’ADNc, les tests de dépistage du virus de la grippe B ont été effectués uniquement sur les échantillons prélevés au service des urgences le jour; les résultats de ces tests étaient négatifs Quatre-vingt-quatre pour cent de tous les tests positifs pour la grippe au laboratoire du West Virginia University Hospital en février étaient positifs pour les données sur la grippe A non montrées

Table View largeTélécharger une enquête clinique sur la grippe aéroportée dans un service d’urgence d’un hôpitalTable Agrandir la photoDétailler une enquête clinique sur la grippe aéroportée dans un service d’urgence d’un hôpitalDix six pour cent des particules du virus grippal ont été détectées dans la première étape. ; μm Cependant,% des isolats ont été recueillis dans la deuxième étape, qui recueille des particules avec un diamètre de -μm, et% ont été recueillies sur le filtre de secours, qui recueille des particules avec un diamètre & lt; Ces résultats indiquent que plus de% des particules virales totales ont été trouvées dans la fraction aérosol respiratoire. Tous les échantillons PCR positifs pour le virus grippal A ont été séquencés et confirmés comme étant un produit d’amplification des données de la séquence du gène de la grippe A , nous avons révélé, à notre connaissance pour la première fois, la présence de particules de virus grippal aéroportées dans un environnement de soins de santé Les patients fortement infectés par la grippe ont des titres viraux élevés dans leurs sécrétions respiratoires , et la durée moyenne de l’excrétion virale est ~ jours Parce qu’un grand nombre de sécrétions respiratoires expirées sont & lt; De plus, dans notre étude, plus de la moitié des particules virales détectées par PCR se situaient dans le diamètre de la fraction respirable de l’aérosol, & lt; La détection de particules virales en suspension dans l’air est difficile. En raison de la plus grande sensibilité et spécificité, la PCR en temps réel a été utilisée en conjonction avec un nouvel échantillonneur d’aérosol à cyclone . de la PCR incluent l’incapacité de déterminer la viabilité de l’organisme, les réactions faussement positives et les interférences. Les contaminants aéroportés ont interféré avec la PCR dans les échantillons d’aérosols. Dans notre étude, tous les échantillons d’aérosols ont été enrichis avec un ARN témoin. le contrôle n’a pas réussi à générer un signal détectable pour les échantillons prélevés au service d’urgence les jours et ce qui suggère la présence d’une substance interférente, une mauvaise isolation de l’ARN ou la dégradation de l’échantillon d’ARN ces jours-là. les résultats ont été confirmés par une analyse de séquence subséquente. Des études futures examineront diverses méthodes d’amélioration En conclusion, les établissements de santé peuvent contenir des quantités détectables de virus grippaux aéroportés pendant la saison grippale. Un certain nombre de facteurs, notamment la température, l’humidité et la gravité de la saison grippale. , pourrait influencer la concentration de particules virales dans un échantillon d’aérosol Des études futures seront nécessaires pour étudier la viabilité et l’infectivité de ces aérosols viraux et, en fin de compte, éclairciront l’importance relative de la transmission aérienne de la grippe localisation.

Remerciements

Nous remercions William Dougherty, Michael Commodore, David Edgell, et Judy Hudnall pour leur aide dans la réalisation de cette étude. Soutien financier Institut national pour la sécurité et la santé au travail NIOSH programme de subventions extramuros RO OH à IC NIOSH chercheurs ont été financés par le budget internePotential conflits d’intérêt Tous les auteurs: non conflits